| 產(chǎn)品名稱 |
RKO-AS45-1 |
| 商品貨號(hào) |
MZ-0494 |
| 中文名稱 |
人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞 |
| 形態(tài)特征 |
上皮細(xì)胞 |
| 生長特性 |
貼壁生長 |
| 特征特性 |
人的cDNA中編碼GADD45的開放閱讀框克隆到表達(dá)載體pCMV.3中，轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌細(xì)胞RKO，建立了RKO-AS45-1細(xì)胞株。該細(xì)胞含有穩(wěn)定整合巨細(xì)胞病毒（CMV）啟動(dòng)子的表達(dá)載體。RKO-AS45-1細(xì)胞系和它的母系RKO一起可用于Gadd45對(duì)DNA修復(fù)、凋亡和藥物敏感性研究。 |
| 細(xì)胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)陰性。 |
| 培養(yǎng)條件 |
MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle＇s Balanced Salts) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10% |
| 傳代方法 |
消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。 |
| 細(xì)胞凍存步驟 |
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。明舟生物按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 復(fù)蘇細(xì)胞步驟 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
| 細(xì)胞傳代步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
| 凍存條件 |
基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS |
